Результаты и обсуждениеСтраница 1
Выращивание штамма на 2Н2О-содержащих средах
.
Для выращивания штамма был выбран ступенчато-увеличивающийся градиент концентрации 2H2О в ростовых средах в присутствии 2 об.% [U -2H] MetOH, так как предпологалось, что постепенное привыкание клетки к 2Н2О будет оказывать благоприятный эффект на параметры роста и общее самочувствие культуры (таблица). Для компенсации ауксотрофности по лейцину эту аминокислоту добавляли в ростовую среду в протонированном виде в концентрации 10 мг/л. Сначала исходный штамм выращивали на 2Н2О-содержащих средах без его предварительной адаптации к 2Н2О, для того чтобы определить его ростовые и биосинтетические параметры на этих средах. При росте исходного штамма на контрольной среде с обычной водой продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации составили 20 и 2.2 ч соответственно (таблица, опыт 1). В промежуточных экспериментах эти параметры изменялись пропорционально концентрации 2Н2О. В частности, продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации увеличивались, а рост и уровень накопления фенилаланина уменьшались, причем самые низкие значения были зафиксированы на максимально дейтерированной среде с 98 об.% 2Н2О. Так, в эксперименте (5), таблица, выход микробной биомассы был снижен в 3.3, а уровень накопления фенилаланина в ростовой среде в 2.7 раз по сравнению с контролем, поэтому было необходимо проводить адаптацию штамма к 2Н2О.
Таблица.
Изотопный состав ростовых сред и параметры бактериального роста исходного штамма
|
|
Компоненты среды, об.% H2O 2H2O MetOH [U -2H] MetOH |
лаг-фаза (ч) |
Выход биомассы((%) |
Время генерации (ч) |
Максимальный уровень накопления фенилаланина в ростовой среде (%) | |||
|
(1) |
98 |
0 |
2 |
0 |
20 |
100.0 |
2.2 |
100.0 |
|
(2) |
73.5 |
24.5 |
0 |
2 |
34 |
85.9 |
2.6 |
97.1 |
|
(3) |
49.0 |
49.0 |
0 |
2 |
44 |
60.5 |
3.2 |
98.8 |
|
(4) |
24.5 |
73.5 |
0 |
2 |
49 |
47.2 |
3.8 |
87.6 |
|
(5) |
0 |
98.0 |
0 |
2 |
60 |
30.1 |
4.9 |
37.0 |
Клеточная адаптация к 2Н2О.
Специальный подход по адаптации заключался в серии из четырех адаптационных пассажей исходной культуры на твёрдых агаризованных средах с 2 об.% [U-2H] MetOH с 0, 24.5, 49, 73.5 и 98 об.% 2Н2О. При этом отбирали отдельные колонии, выросшие на средах с низкими концентрациями 2Н2О. Затем их последовательно пересевали на среды с большей концентрацией 2Н2О, включая среду с 98 об.% 2H2О, проводя их параллельные контрольные рассевы на протонированной среде (степень выживаемости бактерий составила не более 40%).
Популярные статьи:
Двенадцатое и тринадцатое семейства
Два НП — брадикинин и ангиотензин II — давно исследуются главным образом как факторы, участвующие в формировании тонуса сосудов. Брадикинин и его аналоги являются вазодилятаторами, ангиотензин II — вазоконстриктор. Известные пути их синте ...
Химический состав клетки
Клеточное вещество является сложным полифазным коллоидом, т.е. представляет собой систему из двух несмешивающихся фаз. Одна из этих фаз структурно является цитоплазматическим матриксом и выполняет роль водной фазы с переходами от жидкого ...
Австралопитек Бойса
Этот наиболее крупный и сильный из всех австралопитеков получил свое название в честь английского бизнесмена Чарльза Бойса, помогавшего финансировать палеонтологические исследования в Восточной Африке, в результате которых в 1959 г. был н ...