Ферментативная активность

Одним из наиболее важных методов характеристики очищенных мембранных белков несомненно является определение биохимической активности. При этом используются в основном такие же критерии, как и для растворимых белков, но могут возникать и свои трудности. Первая из них связана с тем, что биохимическая активность мембранных белков часто очень сильно зависит от связывания с белком липидов и детергентов. Потеря активности может быть как обратимой, так и необратимой. Целесообразно иметь какую-то оценку удельной активности исследуемого белка in vivo или в составе мембран до солюбилизации. Избыток детергента может оказывать ингибирующий эффект, например за счет разбавления неполярных субстратов в популяции мицелл и уменьшения ферментативной активности. Измеряя активность любого мембранного белка, необходимо иметь в виду, что in situ он находится в окружении липидов, обеспечивающих оптимальную активность. Вторая проблема связана с белками, обладающими «трансбислойной» активностью; примерами могут служить белки, образующие каналы, и транспортные белки. В этих случаях необходимо учитывать перемещение растворенных веществ из одного компартмента в другой.

Популярные статьи:

Формы акации белой
Основной задачей лесного семеноводства является получение семян с высокими наследственными свойствами, поэтому семеноводство акации должно строиться на селекционной основе, т. е. речь должна идти не о семеноводстве вообще, а о семеноводст ...

Потенциал-активируемые натриевые каналы
Методы, которые были использованы для характеристики молекулярной структуры АХР, были также успешно применены к потенциал-активируемым каналам. Ключевыми шагами в этом процессе были биохимическая экстракция и изоляция протеина с последующ ...

Образование лимфы и ее роль
Все ткани организма, исключая поверхностные слои кожи, ЦНС и костную ткань, имеют сеть лимфатических капилляров, которые, в отличие от кровеносных капилляров, с одного конца замкнуты. Из капилляров формируются лимфатические сосуды, лимфат ...