Объекты и методы исследованийСтраница 2
С.Н. Виноградским в практику микробиологии введены элективные (избирательные среды для определенных групп микроорганизмов, обеспечивающие преимущественное развитие одного вида или группы родственных микроорганизмов и менее пригодные или совсем не пригодные для развития других.
Зная физиологические особенности соответствующей группы микробов, можно подобрать такие условия культивирования, при которых будут развиваться лишь представители этой группы. Применяют питательные среды различной консистенции: плотные, жидкие, полужидкие (Теппер и др., 1987).
Для выделения маслянокислых бактерий
используется среда Виноградского (г/л):KH2PO4- 1,0 г.; MgSO4 * 7H2O –0,5 г.; NaCl – 0,5 г.; MnSO4- 0,01 г.; Fe2 (SO4)3*9H2O- 0,01 г.; CaCO3- 20г.; KNO3- 4г.; дистиллированная вода - 1л.
При посеве исследуемой почвы 1 г. растертой стерильным пестиком в ступке почву помещали в пробирку с 10 г. стерильной воды. Затем производили ряд последовательных разведений; 10-1 - 10-7 разведения разливали по 1 мл в большие стерильные пробирки методом глубинного посева. В полученную культуральную жидкость заливали жидкую среду Виноградского до ¾ объема. Пробирки со средами помещают в водяную баню при 80оС на 10-15 мин., так как при кипячении в культуральной жидкости создаются анаэробные условия. Посевы помещают в термостат при температуре 30-35 ос. Инкубация производится в течение 2-3 дней.
При исследовании культуральных признаков обращают внимание на следующие признаки:
1. Изменение цвета среды (изначально среда прозрачная). Цвет меняется от желтого до коричневого.
2. Образование осадка
3. Появление мути.
4. Образование пленки.
Культуру отбирают из середины столбика жидкости и эту каплю помещают на середину предметного стекла, накрывают покровным стеклом и к краю предметного стекла подносят пипетку с раствором Люголя. К другому краю - фильтровальную бумагу, которая засасывает раствор под покровное стекло.
При микроскопировании препарата хорошо видны клетки клостридий с потемневшим содержанием, так как перед спорообразованием в клетках накапливается много гранулезы, которая при взаимодействии с Люголем дает темное окрашивание (Теппер и др., 1987).
Микроскопирование маслянокислых бактерий.
Питательную среду из колбы Вюрца или пробирки берут пипеткой, закрыв указательным пальцем верхний конец и погрузив ее в средний слой сброженной жидкости. Слегка приподняв палец, набирают в пипетку жидкость, снова зажимают пальцем верхний конец пипетки и, вынув ее из колбы, наносят каплю на предметное стекло. К накопительной культуре добавляют каплю раствора Люголя и накрывают покровным стеклом, на которое помещают каплю кедрового масла. При микроскопировании препарата обнаруживаются клетки, в которых можно заметить овальные тельца, сильнопреломляющие свет (споры). В тех местах клетки, где содержится гранулеза, возникает сине- фиолетовое окрашивание. Зарисовывают только окрашенные клетки, явно относящиеся к группе маслянокислых бактерий.
При постановке накопительной культуры целлюлозоразлагающих аэробных бактерий
используют среду Гетченсона. Слой среды Гетченсона-1 см. Вносят 0,5 -1 г. почвы и на кончике шпателя – мел. Колбу закрывают ватной пробкой, помещают в термостат на 10-14 суток. Бумага становится ослизненной и распадается, конус оседает на дно.
Для получения целлюлозоразрушающих аэробных бактерийиспользуют среду (г/л): КН2РО4-0,1; NaCl -0,1; CaCl2-0,1; TeCL3-0,1; MgSO4 *7Н2О- 0,3; NaNO3-2,5; агар-агар -2%.
Среду разливают в чашки Петри и на поверхность накладывают фильтровальную бумагу, нарезанную по размеру чашки Петри и предварительно тоже простерилизованную.
Стеклянной палочкой с оттянутым концом на поверхность фильтра раскладывают параллельными рядами комочки почвы на расстоянии 1см. (по трафарету). Засеяны чашки Петри помещают в эксикатор над водой и ставят в термостат при 25-30оС.
Через 10-14 суток вокруг комочков почвы развиваются комочки целлюлозоразлагающих микроорганизмов в виде желтых, зеленых, оранжевых и коричневых пятен. В местах образования колоний фильтровальная бумага разлагается, ослизняется, становится прозрачной. По морфологии можно дифференцировать колонии плесневых грибов, актиномицетов и бактерий. Принимая общее число высеянных комочков почвы за 100%, можно подсчитать в процентах число комочков почвы, давших колонии целлюлозоразлагающих микроорганизмов. Из зон разрушения клетчатки готовят препарат « раздавленная капля» и описывают выделенные различные целлюлозоразрушающие микроорганизмы.
Популярные статьи:
Нейротрофины в ЦНС
Особенный интерес представляет нахождение популяции клеток, чувствительной к ФРН, в ЦНС. Таковыми являются холинергические нейроны, которые расположены в базальной области переднего мозга и которые иннервируют несколько различных структур ...
Изменение температуры и рН
Зависимость величины из уравнения от температуры и рН означает, по существу, что изменение растворимости может быть достигнуто или путем поддержания постоянства ионной силы раствора или же путем варьирования температурой или рН. Большинс ...
Образ жизни и поведение
Обитатель полупустынь и сухих степей. Питается грызунами, зайцами, в летнее время отлавливает птиц, рептилий и насекомых, входит в его пищу и падаль, изредка – остатки растений, преимущественно злаки. Ведет в основном сумеречный образ жиз ...